UPUTSTVOZA KORIŠĆENJE, PODEŠAVANJE I ODRŽAVANJE OPREME("Sl. glasnik RS", br. 2/2023) |
OPREMA ZA ODREĐIVANJE PRISUSTVA I KONCENTRACIJE MARKERA U DERIVATIMA NAFTE
Određivanje prisustva i koncentracije markera u derivatima nafte ostvaruje se korišćenjem različite opreme i uz pomoć metodologija koje programu pružaju najveću moguću sigurnost. Oprema koja se koristi u programu obeležavanja (markiranja) derivata nafte u Republici Srbiji obuhvata terenske uređaje LSX i LPX, laboratorijske (forenzičke) uređaje MSX i HPLC kao i imuno afinitetne kolone (IAC kolone).
Terenski uređaj za merenje koncentracije markera tipa A u bezolovnim motornim benzinima, gasnom ulju EVRO DIZEL i dizel gorivu GASNO ULJE 0,1
Terenski uređaj LSX detektuje jednu komponentu dvokomponentnog nacionalnog markera tipa A. Ovaj uređaj odmah po uzorkovanju omogućava brzu identifikaciju i određivanje količine komponente nacionalnog markera tipa A.
Rad uređaja LSX zasniva se na jedinstvenom svojstvu fluorescencije komponente nacionalnog markera tipa A koje se utvrđuje tehnikom fluorescentne spektroskopije. Uređaj LSX koristi specijalizovan sistem pobudnih lasera, filtriranja svetlosti i detektovanja putem prilagođene optoelektronike. Kada uređaj registruje signal koji emituje marker, unutrašnji softver koristi složene algoritme kako bi razložio signal, detektovao marker i odredio količinu markera u uzorku. Uprkos svim ovim složenim operacijama, ovaj terenski uređaj jednostavan je za upotrebu.
Testiranje uzoraka jednostavan je proces koji se izvodi u nekoliko koraka i traje manje od dva minuta. Osnovna namena ovog uređaja je indikacija rezultata testa:
a) Pozitivan Rezultat
90% ≤ Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte ≤ 105%
Na ekranu uređaja LSX: zeleno tj. "Pozitivan"
b) Rezultat Upozorenje
80% ≤ Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte < 90%
Na ekranu uređaja LSX: žuto tj. "Upozorenje"
c) Negativan Rezultat
Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte < 80%
Na ekranu uređaja LSX: crveno tj. "Negativan"
d) Rezultat Potrebna MSX analiza zelenom bojom
Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte > 105%
Na ekranu uređaja LSX: "Potrebna analiza na MSX uređaju" zelenom bojom
e) Rezultat Potrebna MSX analiza žutom bojom
Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte nije određena jer je uzorak izvan softverskog modela uređaja
Na ekranu uređaja LSX: "Potrebna analiza na MSX uređaju" žutom bojom
Postupak kontrole prisustva i koncentracije markera u derivatima nafte detaljno je opisan u Uputstvu za markiranje derivata nafte.
Neophodna oprema i potrošni materijal
Za testiranje uzoraka derivata nafte uz pomoć uređaja LSX, neophodno je sledeće:
1. Uređaj LSX
2. Vijale od 5 ml za jednokratnu upotrebu za uzorke i poklopci
3. Plastične pipete od 3 ml ili 5 ml za jednokratnu upotrebu za prenos uzoraka
Rukovanje uređajem
Pridržavati se sledeće procedure za rukovanje uređajem:
1. Izabrati neogrebanu i neokrnjenu praznu vijalu za uzorak
2. Napuniti vijalu derivatom nafte do grlića i čvrsto zavrnuti poklopac
3. Temeljno obrisati vijalu čistom tkaninom kako bi se uklonili svi otisci prstiju i ostaci derivata nafte
4. Ubaciti vijalu u komoru za uzorke i zatvoriti poklopac uređaja
5. Na ekranu uređaja odabirom odgovarajuće opcije potvrditi da li se testiranje vrši u prisustvu tržišnog inspektora ili ne. Ukoliko prisustvuje testiranju, tržišni inspektor unosi ime i prezime kao i svoju šifru.
6. Na ekranu uređaja odabrati opciju "Test", a potom izabrati i vrstu derivata nafte
7. Uneti naziv uzorka (npr. ime maloprodajnog objekta)
8. Uneti ostale podatke vezane za uzorak (npr. da li je uzorkovano iz pištolja ili iz rezervoara, zatim iz kog rezervoara ili sa kog pištolja i slično)
9. Kada je analiza gotova (približno za 1,5 minut), rezultat će se pojaviti na ekranu uređaja
10. Rezulat se prikazuje na sledeći način:
a) "Pozitivan" (na ekranu ispisano zelenom bojom)
b) "Upozorenje" (na ekranu ispisano žutom bojom)
c) "Negativan" (na ekranu ispisano crvenom bojom)
d) "Potrebna MSX analiza" (na ekranu ispisano zelenom bojom)
e) "Potrebna MSX analiza" (na ekranu ispisano žutom bojom)
Podešavanje i kontrola kvaliteta
Uređaj LSX podešen je od strane proizvođača. Podešavanje se vrši na osnovu spektralnih karakteristika derivata nafte u Republici Srbiji. Uređaj se podešava putem algoritamskih modela softvera tako da prepoznaje spektralni otisak derivata nafte. Ovaj otisak prepoznaje se kao pozadinski zvuk i filtrira se kroz softver uređaja LSX kako bi se signal lakše prepoznao i preciznije izmerio. Kako bi se osiguralo da svi uređaji budu adekvatno podešeni vrše se stalne revizije rezultata testiranja dobijenih upotrebom ovog uređaja.
Provera pravilnog rada uređaja se vrši pomoću verifikacionih standarda kako bi se osiguralo da uređaj funkcioniše na pravi način. Verifikacija se vrši na dnevnoj bazi (ujutru i uveče prilikom izdavanja uređaja) kao i na terenu pre testiranja. Ukoliko verifikacija tj. provera podešavanja pokaže nepravilnosti, uređaj će biti servisiran ili zamenjen.
Transport:
Uređaj LSX transportuje se u otpornom prenosivom koferu. Da bi se uređaj koristio, treba ga jednostavno izvaditi iz kofera i dozvoliti mu da se stabilizuje. Uređaj radi na baterije.
Održavanje:
Održavanje uređaja ograničeno je na svakodnevno čišćenje spoljašnjosti uređaja mekom tkaninom (ne treba koristiti nikakva sredstva za čišćenje niti hemikalije) kako bi se uklonila zemlja, prašina ili bilo kakve nečistoće. Korisnici bi trebalo posebno da povedu računa kako se na ventilacionim otvorima ne bi zadržala nikakva prljavština ili strana tela koja bi ih blokirala. Pre upotrebe, korisnici treba da izvrše vizuelnu kontrolu uređaja kako bi se ustanovilo postojanje vidljivih oštećenja, poput pukotina, tastera koji nedostaju ili udubljenja. One uređaje na kojima se utvrde vidljiva oštećenja treba vratiti Licu koje pruža uslugu markiranja radi daljeg pregleda i utvrđivanja pogodnosti za korišćenje.
Nikakav prenos derivata nafte (npr. sipanje u vijalu za uzorke) ne treba vršiti iznad uređaja kako bi se osiguralo da, u slučaju prosipanja, derivat nafte ne dođe u dodir sa uređajem.
Izuzev u slučajevima postavljanja i uklanjanja vijale sa uzorkom, poklopac komore za uzorke uvek treba da bude zatvoren.
Nakon upotrebe na terenu, uređaj LSX treba priključiti na dostupan izvor naizmenične struje kako bi se baterija napunila. Kako bi se istrošena baterija u potpunosti napunila, potrebno je najmanje šest časova.
Terenski uređaj za merenje koncentracije markera tipa A u TNG-u
Terenski uređaj LPX meri koncentraciju markera tipa A u TNG-u. Ovaj uređaj odmah po uzorkovanju omogućava brzu identifikaciju i određivanje količine markera u datom uzorku.
Proces merenja koncentracije markera se sastoji od uvođenja uzorka TNG-a u staklenu kivetu koja je sastavni deo uređaja.
Merenje koncentracije markera jednostavan je proces koji se izvodi u nekoliko koraka. Očitavanje se vrši jednostavnim pritiskom na dugme a rezultati prikazuju na ekranu tablet računara koji se povezuje sa LPX uređajem. Ovi rezultati određuju se na osnovu koncentracije komponente za markiranje koja je detektovana u uzorku:
a) Pozitivan rezultat
Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte ≥ 80%
Na ekranu tablet računara uz LPX: "Pozitivan"
b) Negativan rezultat
Koncentracija markera tipa A u derivatu nafte < 80%
Na ekranu tablet računara uz LPX: "Negativan"
Rad uređaja LPX zasniva se na jedinstvenom svojstvu fluorescencije markera koje se utvrđuje tehnikom fluorescentne spektroskopije. Uređaj LPX koristi specijalizovan sistem pobudnih lasera, filtriranja svetlosti i detektovanja putem prilagođene optoelektronike.
Neophodna oprema i potrošni materijal
Za testiranje uzoraka derivata nafte uz pomoć uređaja LPX, neophodno je sledeće:
1. Uređaj LPX
2. Tablet računar sa Authentix aplikacijom
3. Kabl RS232
4. Adapteri za lako i brzo povezivanje uređaja sa izvorom TNG-a
Rukovanje uređajem
LPX uređaj ima dva ventila uz pomoć kojih se reguliše dovod odnosno odvod TNG-a iz kivete koja je smeštena unutar uređaja.
Ventil 1 - koji se nalazi sa desne strane uređaja, je trosmerni:
- Smer 1 - "FILL" ↓ Dovod TNG-a u uređaj (punjenje kivete)
- Smer 2 - "READ" ← Očitavanje rezultata (zatvaranje ventila 1)
- Smer 3 - "EMPTY" ↑ Pražnjenje kivete
Ventil 2 - koji se nalazi sa leve strane uređaja, je dvosmerni:
- Smer 1 - "PURGE" ↑ Ispuštanje TNG-a iz uređaja
- Smer 2 - "CLOSED" → Zatvaranje ventila 2
Pročišćavanje kivete
Pre očitavanja koncentracije markera u TNG-u neophodno je najpre pročistiti kivetu koja se nalazi unutar uređaja i to uz pomoć ventila, prateći sledeću proceduru.
1. Postarati se da su ventili 1 i 2 zatvoreni.
2. Povezati uređaj preko adaptera sa izvorom TNG-a.
3. Okrenuti ventil 1 u položaj za punjenje kivete.
4. Istovremeno lagano okrenuti ventil 2 u položaj za ispuštanje TNG-a i pustiti TNG da lagano protiče kroz kivetu tokom najduže 10 sekundi.
5. Zatvoriti ventil 2.
6. Okrenuti ventil 1 u položaj za pražnjenje kivete i pustiti TNG da izađe.
7. Okrenuti ventil 1 u položaj za punjenje kivete tokom 3 sekunde.
8. Okrenuti ventil 1 u položaj za pražnjenje kivete i pustiti TNG da izađe.
9. Ponoviti korake 7 i 8 tri puta.
Proceduru pročišćavanja kivete ponoviti 3 puta svaki put pre početka merenja koncentracije markera u novom uzorku.
Merenje koncentracije markera u uzorku
Pre merenja koncentracije markera u uzorku, neophodno je povezati LPX uređaj na izvor TNGa pomoću odgovarajućeg adaptera.
1. Okrenuti ventil 1 u položaj za pražnjenje kivete i zatim pritisnuti "READ" (prazna kiveta)
2. Okrenuti ventil 1 u položaj za punjenje kivete tokom 3 sekunde.
3. Okrenuti ventil 1 u položaj za očitavanje rezultata.
4. Pritisnuti "READ"
5. Okrenuti ventil 1 u položaj za pražnjenje kivete.
6. Ponoviti korake 2-5 još 2 puta.
7. Nakon tri očitana rezultata, pročistiti kivetu prema proceduri za pročišćavanje kivete.
8. Ponoviti tri puta korake od 2 do 7.
9. Okrenuti ventil 1 u položaj za pražnjenje kivete i zatim pritisnuti "READ" (prazna kiveta)
10. Nakon završenog merenja okrenuti oba ventila u položaj zatvoreno i odvojiti uređaj LPX od izvora TNGa.
11. Izvan zone opasnosti od izbijanja i širenja požara, uključiti tablet računar sa Authentix aplikacijom.
12. Uneti detalje kontrole u zadata polja i sve dodatne informacije upisati u polje ‹Napomena›.
13. Odabirom odgovarajuće opcije potvrditi da li se testiranje vrši u prisustvu tržišnog inspektora ili ne. Ukoliko prisustvuje testiranju, tržišni inspektor unosi ime i prezime kao i svoju šifru.
14. Kada se na tablet računaru pojavi poruka "Molimo vas da uradite ’download’ podataka" povezati uređaj LPX1000 na tablet računar pomoću kabla RS232.
15. Po uspešnom prenosu podataka sa LPX uređaja na tablet računar, pojaviće se poruka na ekranu LPX uređaja "All Downloaded!".
16. Na ekranu tablet računara će biti ispisan rezultat merenja koncentracije markera u TNG-u:
a) Pozitivan ukoliko je koncentracija markera tipa A u uzorku ≥ 80%, tj.
b) Negativan ukoliko je koncentracija markera tipa A u uzorku < 80%.
17. Ukoliko su merenja bila nepravilna, na ekranu tablet računara će se pojaviti poruke da se merenje ponovi.
18. Po dobijanju konačnog rezultata, isključiti tablet računar i popuniti odgovarajuće obrasce koji se odnose na merenje koncentracije markera u TNG- u.
Podešavanje i kontrola kvaliteta
Pre prvog korišćenja uređaj LPX je podešen od strane proizvođača.
Tokom rukovanja, uređaj se periodično proverava (na svaka tri meseca) od strane Lica koje pruža uslugu markiranja koristeći kalibracione standarde za proveru, kako bi se osiguralo da uređaj funkcioniše na pravi način. Ukoliko provera podešavanja pokaže nepravilnosti, uređaj će biti servisiran ili zamenjen. Nema potrebe za podešavanjima na terenu.
Transport
Uređaj LPX transportuje se bez posebne kutije i pogodan je za upotrebu na terenu. Uređaj radi na baterije.
Održavanje
Održavanje uređaja ograničeno je na svakodnevno čišćenje spoljašnjosti uređaja mekom tkaninom (ne treba koristiti nikakva sredstva za čišćenje niti hemikalije) kako bi se uklonila zemlja, prašina ili bilo kakve nečistoće. Pre upotrebe, korisnici treba da izvrše vizuelnu kontrolu uređaja kako bi se ustanovilo postojanje vidljivih oštećenja, poput pukotina, delova koji nedostaju ili udubljenja. Uređaje na kojima se utvrde vidljiva oštećenja treba vratiti Licu koje pruža uslugu markiranja radi daljeg pregleda i utvrđivanja pogodnosti za korišćenje.
Sve priključne delove opreme, poput adaptera za povezivanje, treba periodično proveravati u smislu da li su dovoljno zategnuti ili oštećeni.
Posle upotrebe, uređaj LPX treba ugasiti. Ukoliko je neophodna zamena baterija, izvodi se tako što se ukloni pregrada sa baterijama koja se nalazi s prednje strane uređaja, i zatim se zameni novim baterijama.
Nakon upotrebe na terenu, tablet računar treba ugasiti i priključiti na dostupan izvor naizmenične struje kako bi se baterija napunila. Kako bi se istrošena baterija u potpunosti napunila, potrebno je
Laboratorijski (forenzički) uređaj za merenje koncentracije markera tipa A i tipa B u bezolovnim motornim benzinima, gasnom ulju EVRO DIZEL i dizel gorivu GASNO ULJE 0,1
Laboratorijski (forenzički) uređaj MSX identifikuje i meri koncentraciju druge komponente dvokomponentnog nacionalnog markera tipa A, kao i prisustvo nacionalnog markera tipa B markera.
Metoda se zasniva na simultanoj identifikaciji i kvantifikaciji NMA i NMB masenim spektroskopom nakon razdvajanja na LTM koloni. Akvizicija podataka vrši se u SIM modu.
Neophodna oprema, hemikalije i pribor
1. Kerozin
2. Kalibracioni standard CAL1
3. Kalibracioni standard CAL2
4. Kalibracioni standard CAL3
5. Kalibracioni standard CAL4
6. Kalibracioni standard CC
7. Kontrolni standard QC
8. Interni standard ISTD
9. GS-MS
10. GC autosempler
11. Softver za akviziju i obradu podataka
12. LTM GC kolona
13. Dispenzer za interni standard
14. Dispenzer za kerozin
15. Automatska pipete
16. Vortex
17. Vijali 2 cm3 sa pratećim čepovima.
18. Vijali 5 cm3 sa pratećim čepovima.
19. Umetci za vijale od 0.5 cm3
20. Transfer pipete
Napomena: Kalibracioni standardi, QC i interni standard pripremljeni su u laboratoriji Authentix-a, akreditovanoj prema standardima ISO/IEC 17025 i ISO/IEC 17034. Navedeni standardi - sertifikovani referentni materijali dostavljaju se uz sertifikate o analizi izdate u skladu sa zahtevima standarda ISO/IEC 17034.
Priprema kalibracione krive
Za kalibracionu krivu koristi se pet kalibracionih nivoa - sertifikovanih referentnih materijala. Kalibracioni rastvori se isporučuju spremni za upotrebu i kao takvi samo se sipaju u vijale od 2 cm3.
Priprema uzoraka i sprovođenje interne kontrole kvaliteta
Za potrebe sprovođenja interne kontrole pripremaju se sledeći reagensi:
1. DB (Double Blank),
2. IB (Instrument Blank)
3. QC (Quality Control).
4. CC (Calibration Control)
DB (Double Blank) se priprema doziranjem kerozina u vijale od 2 cm3. IB (Instrument Blank) se priprema doziranjem kerozina i internog standarda ISTD u vijale od 5 cm3, iz kojih se nakon homogenizacije transferuje u vijale od 2 cm3. CC (Calibration Control) je sertifikovani referentni materijal koji se isporučuje spreman za upotrebu i kao takav se sipa u vijale od 2 cm3.
QC (Quality Control) i radni uzorci pripremaju se doziranjem istih u vijale od 5 cm3. Nakon toga se u iste vijale doziraju kerozin i interni standarda. Nakon homogenizacije QC i radni uzorci se takođe transferuju u vijale od 2 cm3. U cilju ocene ispunjenja zahteva za ponovljivost metode, radni uzorci se pripremaju u dve probe.
Rukovanje uređajem i ispitivanje uzoraka
1. U cilju verifikacije ispravnosti uređaja uraditi Tune evaluation proveru preko softvera uređaja.
2. Nakon pozitivnih rezultata verifikacije postaviti vijale sa uzorcima i reagensima za sprovođenje interne kontrole kvaliteta na numerisane pozije GC autosemplera.
3. Koristeći softver ispisati sekvencu za rad uređaja.
4. Započeti analizu.
5. Po završetku analize i prikupljanja podataka, softver uređaja izvršiće obradu rezultata.
6. Nakon koja je sprovedena uz ispitivanje radnih uzoraka, rezultati se prenose u izveštaje u ispitivanju verifikacije ispunjenja zahteva interne kontrole.
Održavanje uređaja
Održavanje koje sprovodi osoblje laboratorije
1. Pražnjenje Waste viala, pranje i punjenje Wacx viala autosemplera sprovodi se najčešće jednom nedeljno, preporučno ponedeljkom u skladu sa originalnim uputstvom proizvođača opreme (How to Rinse and Replenish Rinse and Wacx Vials - Authentix Guide ID 190).
2. Zamena septe vrši se po potrebi. Ukoliko na to ukažu Tune, rezultati interne kontrole i/ili druge hromatografske anomalije. Zamena se vrši u skladu sa originalnim uputstvom proizvođača opreme (How to change a cepta - Authentix Guide ID 191).
3. Zamena linera vrši se po potrebi. Ukoliko na to ukažu rezultati interne kontrole i/ili druge hromatografske anomalije. Zamena se vrši u skladu sa originalnim uputstvom proizvođača opreme (Changing the Inlet Liner - Authentix Guide ID 189)
4. Zamena se vrši u skladu sa originalnim uputstvom proizvođača opreme (How to change a - Authentix Guide ID 191).
Održavanje koje sprovodi isporučilac opreme
1. Preventivno održavanje i funkcionalnu proveru opreme, svaka četri meseca, sprovodi servisno osoblje proizvođača markera - Authentix US. Rezultati provere sa ocenom usaglašenosti dostavljaju se rukovodiocu laboratorije i čuvaju se uz kartone predmetne opreme.
2. Interventno održavanje, takođe sprovodi sprovodi servisno osoblje proizvođača markera - Authentix US.
Laboratorijski (forenzički) uređaj za merenje koncentracije markera tipa A u TNG-u
Laboratorijski uređaj HPLC identifikuje i meri koncentraciju nacionalnog markera tipa A u TNG-u, nakon ekstrakcije.
Uređaj HPLC primenjuje tehniku tečne hromatografije pod visokim pritiskom za analizu koncentracije markera u tečnom naftnom gasu nakon ekstrakcije. Tečna hromatografija predstavlja separacionu metodu koja se zasniva na različitoj raspodeli komponenata tečne smeše između mobilne (tečne) faze i stacionarne (čvrste) faze u koloni.
Ovaj uređaj je modifikovan i prilagođen radi lakše detekcije specifične komponente markera koji se koristi za markiranje tečnog naftnog gasa. Mobilna faza se kroz kolonu propušta pod visokim pritiskom. Automatski injektor uređaja pruža mogućnost kontinualnog uvođenja uzorka u mobilnu fazu koja uvodi uzorak u kolonu uređaja. Kolona uređaja je smeštena u termostatirani odeljak za kolonu. Unutrašnjost kolone sadrži specijalno pakovanje koje predstavlja stacionarnu fazu i koje je neophodno da bi se izvršilo razdvajanje komponenata uzorka. Na fluorescentnom detektoru uređaja vrši se identifikacija i kvantifikacija jedinjenja markera.
Neophodna oprema, hemikalije i pribor
1. Uređaj HPLC
2. Vaga sa tačnošću 0.01 g
3. Termometar pogodan za merenje ambijentalne temperature sa rezolucijom od 0.1 °C
4. Ultrazvučno kupatilo
5. Ostala prateća laboratorijska oprema i pribor
6. Vijale od 2 cm3
7. Metanol
8. Bidestilovana voda
9. LG-A standard za pripremu kalibracione krive
Priprema kalibracione krive
Za kalibracionu krivu priprema se sedam kalibracionih nivoa od interesa. Za pripremu se koristi LG-A standard koji se razblažuje metanolom u skladu sa metodom ispitivanja. Pripremljeni kalibracioni rastvori se sipaju u vijale od 2 cm3.
Priprema uzoraka i sprovođenje interne kontrole kvaliteta
1. Na vagi sa tačnošću 0.01 g odmeriti bocu sa uzorkom TNG-a.
2. Nakon merenja na bocu postaviti adapter za crevo.
3. U dve ispiralice pomoću dispanzete sipati metanol za ekstrakciju markera.
4. Ulazni krak sa T-račve ispiralice spojiti pomoću silikonskog creva se adapterom na boci sa uzorkom TNG-a. Izlazni krak prve ispiralice pomoću silikonskog creva spojiti sa ulaznim krakom druge ispiralice, a izlazni krak druge ispiralice pomoću silikonskog creva povezati za spoljnom atmosferom u svrhu nesmetanog otparavanja TNG-a.
5. Početak ektrakcije: Pažljivo otvoriti ventil za ispuštanje tečne faze i pratiti porast nivoa tečnosti u prvoj ispiralici. Kada se nivo poveća oko dva puta, što odgovara ispuštanju u trajanju od oko 90 sekundi, ekstrakcija se prekida zatvaranjem ventila.
6. Posle spontanog otparavanje tečne faze na sobnoj temperaturi pristupa se ultrazvučnom tretmanu u cilju odstranjivanja zaostalog TNG-a u metanolu.
7. Po isteku vremena rastvor ispiralice prebaciti u normalni sud u kojem je prikupljan metanol od ispiranja ostalih delova aparature kroz koje je prolazio TNG.
8. Kada je završeno prebacivanja i ispiranje, normalni sud dopuniti do crte i sadržaj u njemu homogenizovati mućkanjem. Deo rastvora presuti u špric, profiltrirati u vijal od 2 cm3, preko najlonskog filtera veličine pora 0.2 μm. Ovako pripremljen uzorak je spreman za određivanje na HPLC-u. Sadržaj druge ispiralice se koristi za svrhu provere efikasnosti ekstrakcije.
9. Pored provere efikasnosti ekstrakcije, a u svrhu interne kontrole kvaliteta, uz uzorke se ispituju Blank uzorci i CC (Calibration Control) uzorci. Blank uzorka se priprema sipanjem čistog metanola u vijale od 2 cm3. CC (Calibration Control) uzorak je jedan od kalibracionih nivo iz središnjeg dela kalibracione krive koji se sipa u vijala od od 2 cm3.
Rukovanje uređajem i ispitivanje uzoraka
1. Postaviti vijalu sa uzorkom na podlogu za automatsko uzorkovanje u uređaju HPLC
2. U softveru uređaja HPLC:
a. obeležiti poziciju vijala za uzorak koji se testira,
b. uneti sekvencu,
c. započeti analizu.
3. Po završetku analize i prikupljanja podataka, softver uređaja izvršiće obradu rezultata.
Nakon koja je sprovedena uz ispitivanje radnih uzoraka, rezultati se prenose u izveštaje u ispitivanju verifikacije ispunjenja zahteva interne kontrole.
4. Na osnovu razlika masa boce, gustine TNG-a i temperature izračunava se koncentracija markera u TNG-u.
Održavanje uređaja
Održavanje koje sprovodi osoblje laboratorije
1. Zamena HPLC predkolona i kolona u skladu sa uputstvom proizvođača opreme.
2. Zamena frite i sintera u skladu sa uputstvom proizvođača opreme.
Održavanje koje sprovodi isporučilac opreme
1. Preventivno održavanje i funkcionalnu proveru opreme, svaka četri meseca, sprovodi servisno osoblje proizvođača markera - Authentix US. Rezultati provere sa ocenom usaglašenosti dostavljaju se rukovodiocu laboratorije i čuvaju se uz kartone predmetne opreme.
2. Interventno održavanje, takođe sprovodi sprovodi servisno osoblje proizvođača markera - Authentix US.
Laboratorijska oprema za određivanje prisustva markera tipa B i izvoznog markera u TNG-u
Za određivanje prisustva markera tipa B i izvoznog markera u TNG-u koriste se imuno afinitetne kolone (IAC kolone) koje omogućavaju brzu identifikaciju markera tipa B ili izvoznog markera u uzorku. Pomoću IAC kolona vrši se kvalitativno određivanje prisustva markera.
Metoda se zasniva na otparavanju TNG-a, rastvaranju suvog ostatka i eluiranju rastvora kroz imunoafinitetnu kolonu.
Neophodna oprema, hemikalije i pribor
1. Imuno afinitetna kolona (IAC kolona)
2. Boca sa uzorkom TNG-a
3. Hemijski reagensi
4. Vaga sa tačnošću 0.01 g
5. Ostala prateća laboratorijska oprema
6. Bidestilovana voda
7. Fosfatni pufer - PBS
8. Apsolutni etanol (p.a.)
9. LG -B standard za pripremu kontrolnih rastvora
Rukovanje IAC kolonama
Pridržavati se sledeće procedure za korišćenje IAC kolona:
1. Na vagi sa tačnošću 0.01 g odmeriti bocu sa uzorkom TNG-a. Pre merenja bocu je neophodno očistiti od vidljivih nečistoća i staviti da se termostatira u laboratorijskim ambijentalnim uslovima minimum dva sata. Boca se meri sa zaštitnim čepom na ventilu za ispuštanje tečne faze.
2. Nakon merenja sa boce se odvrne zaštitni čep sa ventila za ispuštanje tečne faze i na njegovu poziciju postavi adapter za crevo. Boca sa adapterom se postavi na laboratorijski lift, tako da je tako da je adapter u donjem položaju.
3. U ispiralice se sipa rastvor za ekstrakciju dobijen mešanjem etanola i fosfatnog pufera.
4. U telo ispiralice se postave T-račve i spoj na šlifu osigura klipsom.
5. Ulazni krak sa T-račve ispiralice se spoji pomoću silikonskog creva se adapterom na boci sa uzorkom TNG-a. Izlazni krak ispiralica se pomoću silikonskog creva poveže za spoljnom atmosferom u svrhu nesmetanog otparavanja TNG-a.
6. U cilju uspostavljanja što kraćih veza između boce i ispiralice visina se podesi pomoću laboratorijskog lifta i kleme za ispiralice.
7. Nakon toga pristupa se ispuštanju i otparavanju TNG-a. Pažljivo se otvori ventil za ispuštanje tečne faze i prati porast nivoa tečnosti u prvoj ispiralici. Kada se ispusti oko 50 cm3 ispuštanje se prekida zatvaranjem ventila.
8. Nakon toga aparatura se ostavlja na sobnoj temperaturi da bi tečna faza isparila. Isparavanje se može podesiti pažljivim mešanjem tečnosti u ispiralici.
9. Po završetku ispiranja aparatura se rasklapa. U telo ispiralice pomoću dispanzete sipa se 50 cm3 pripremljenog rastvora. Nakon toga pristupa se mešanju u trajanju od oko 2 min.
10. Na bocu sa preostalim uzorkom TNG-a vrati se zaštitni čep i boca se izmeri na vagi sa tačnošću od 0.01 g.
11. Imunoafinitetnu kolonu pričvrstiti na stativ, a na vrat kolone fiksirati špric. U špric sipati rastvor iz ispiralice i otpočeti eluranje. Brzina eluranja treba da bude 3-4 kapi u sekundi i može se podešavati klipom šprica. Ne sme se dopustiti da se gel u koloni osuši.
12. Ukoliko je marker LG-B prisutan u uzorkovanom TNG-u, u IAC koloni će se pojaviti crveni/roze prsten.
13. Ukoliko marker LG-B nije prisutan u uzorkovanom TNG-u, neće doći do obojenja u IAC koloni. U ovom slučaju ista kolona se može ponovo koristiti u toku serije ispitivanja. Na kolonu je potrebno vratiti najpre donji pa potom gornji poklopac. Pre vraćanja donjeg poklopca potrebno je pritiskom prstiju istisnuti vazduh iz poklopca a zatim vratiti poklopac na test kolonu.
Rok upotrebe
IAC kolone imaju rok upotrebe nakon čijeg isteka se ne mogu koristiti za potrebe nacionalnog programa markiranja goriva u Republici Srbiji. Ista kolona može se koristiti najviše 10 puta u toku serije ispitivanja, ukoliko su svi testovi bili negativni.
LFD kitovi za određivanje prisustva nacionalnog markera tipa X u uljima za loženje.
Za određivanje prisustva nacionalnog markera tipa H u uljima za loženje koriste se LFD kitovi. LFD (lateral flow immunochromatographic assay) ispitivanje radi na principima afinitetne hromatografije i omogućava brzu identifikaciju nacionalnog markera tipa H u uljima za loženje.
Neophodna oprema, hemikalije i pribor
Komplet za LFD testiranje upakovan u zapečaćenu foliju koji sadrži sledeće komponente:
1. LFD uređaj upakovan u zapečaćenu foliju,
2. Plastična pipeta za jednokratnu upotrebu zapremine 3 cm3,
3. Plastična boca za mešanje zapremine 20 cm3,
4. Pripadajući poklopac sa ugrađenom kapaljkom za boca za mešanje,
5. Bočica koja sadrži pufer za ekstrakciju zapremine 2 cm3.
Priprema i ispitivanje uzorka
1. Uzima se uzorak goriva ulja za loženje koji se testira.
2. Sadržaj bočice koja sadrži pufer za ekstrakciju prespe se u plastičnu bocu za mešanje.
3. Baca za mešanje puni se do grla uzorkovanim uljem za loženje upotrebom pipete iz kompleta.
4. Zavrne se pripadajući poklopac sa ugrađenom kapaljkom za bocu za mešanje, potom zatvori i snažno mućka 60 sekundi.
5. Boca za mešanje se postavi na ravnu površinu i ostavi da se slegne sve dok se sadržaj vidljivo ne razdvoji na dva različita sloja.
6. Izvadi se LFD uređaj iz zapečaćene folije.
7. Otvori se poklopac boce za mešanje.
8. Boca nežno okrene i nanese se 5 kapi rastvora u kružno udubljenje (bunar) LFD uređaja
9. Sačeka se 5 minuta da se test završi.
Tumačenje rezultata
a) Jedna linija na poziciji C
Test uspešan, rezultat pozitivan, prisutan nacionalni marker tipa H
b) Dve linije, po jedna na pozicijama C i T
Test uspešan, rezultat negativan, nacionalni marker tipa H nije prisutan
Napomena: U malo slučaju da se C linija ne pojavi, test nije uspeo i treba ponoviti određivanje upotrebom novog LFD kompleta. C linija je kontrola i uvek treba da se pojavi.
Rok upotrebe
Pre upotrebe provera se rok upotrebe na spoljnoj strani pakovanja LFD kompleta. LFD kompleti kojima je istekao rok ne smeju se koristiti i treba ih vratiti Authentix-u.
NAPOMENA
U cilju proširenja i poboljšanja efikasnosti programa, sve gore navedene procedure će biti podložne promenama u skladu sa procesom kontrole i sistema upravljanja kvalitetom Lica koje pruža uslugu markiranja uz prethodnu saglasnost ministarstva nadležnog za poslove energetike.
Ovo uputstvo stupa na snagu narednog dana od dana objavljivanja u "Službenom glasniku Republike Srbije", a danom stupanja na snagu ovog uputstva prestaje da važi Uputstvo za korišćenje, podešavanje i održavanje opreme ("Službeni glasnik RS", broj 67/17).